篩選獲得一株 產 β-半乳糖苷酶的克雷伯氏菌,該酶具有較好的 轉糖苷活性。 首次對克雷伯氏菌來源的 β-半 乳糖苷酶基因進行重組表達, 成功得到具有優良 轉糖苷活性的 β-半乳糖苷酶,并探究其酶法轉化 乳糖合成 GOS 的工藝條件,為豐富 β-半乳糖苷酶 資源及低聚半乳糖制備提供理論依據。水平搖床,江蘇其林貝爾儀器制造有限公司; 電熱鼓風干燥箱、YXQ-75SII壓力蒸汽滅菌器,上海博迅實業 有限公司;生物安全柜,青島海爾特種電器有限公 司;高速離心機,英國 BECKMAN COULTER;超聲 波細胞破碎儀,南京南京先歐儀器制造有限公司; PCR 儀, 德國 Biometra 公司; 凝膠成像儀, 上海 Tanon 公司;Multitemp III 恒溫循環水浴器、 瓊脂 糖凝膠電泳儀, 美國 GE 公司;Agilent 1260 高效 液相色譜-示差折光檢測器,美國 Agilent 公司。
經重組 表達后的 β-半乳糖苷酶酶活力比野生菌株提高 約 10 倍,且轉糖苷活性保持在較高水平。 酶法轉 化乳糖過程中, 最優條件下可使 GOS 得率達到 44%, 與已報道的 β-半乳糖苷酶相比具有良好的 轉糖苷作用。 該研究結果表明克雷伯氏菌 B5582Y 來源的 β-半乳糖苷酶及其重組酶在低聚半乳糖 合成中具有較大的應用潛力。